உயர் செயல்திறன் திரவ நிறப்பகுப்பாய்வு (HPLC) மூலம் பழங்கள் மற்றும் காய்கறிகளில் உள்ள ஆக்சாலிக் அமிலத்தின் அளவைக் கண்டறிதல்

நிர்ணயம் ஆக்சாலிக் அமிலம் உயர் செயல்திறன் திரவ நிறப்பிரிகை (HPLC) மூலம் பழங்கள் மற்றும் காய்கறிகளில் உள்ள உள்ளடக்கம்
1. பரிசோதனைக் கொள்கை மற்றும் முறை வடிவமைப்பு
பழங்கள் மற்றும் காய்கறிகளில் காணப்படும் ஒரு பொதுவான கரிம அமிலமான ஆக்சாலிக் அமிலத்தின் உள்ளடக்கம், உணவின் சுவையையும் ஊட்டச்சத்து மதிப்பையும் நேரடியாகப் பாதிக்கிறது. இந்தச் சோதனையானது, தலைகீழ்-கட்ட உயர் செயல்திறன் திரவ நிறப்பகுப்பாய்வு (RP-HPLC) முறையைப் பயன்படுத்துகிறது. அமில நகரும் கட்டச் சூழல்களில், ஒரு C18 நிறப்பகுப்பாய்வுக் கலத்தைப் பயன்படுத்தி, குறுக்கிடும் பொருட்களிலிருந்து ஆக்சாலிக் அமிலம் அடிமட்டப் பிரிப்பு செய்யப்படுகிறது. ஆக்சாலிக் அமில மூலக்கூறுகளில் உள்ள கார்பாக்சில் தொகுதிகளின் புற ஊதாக் கதிர் உறிஞ்சும் பண்புகளின் அடிப்படையில், அளவுசார் பகுப்பாய்விற்காக 210 நானோமீட்டரில் அமைக்கப்பட்ட ஒரு புற ஊதாக் கதிர் உணரி பயன்படுத்தப்படுகிறது.
2. திட்ட வரைபடம் மற்றும் மாதிரி தயாரிப்பு
தரநிலைக் கரைசல்களைத் தயாரிக்க, படிப்படியான நீர்த்தல் முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது: 25.0 மி.கி ஆக்சாலிக் அமில டைஹைட்ரேட்டைத் துல்லியமாக எடைபோட்டு, 1 மி.கி/மி.லி செறிவுள்ள மூலக் கரைசலைப் பெறுவதற்காக, அதனை 25 மி.லி அதிதூய நீரில் நீர்த்த வேண்டும். இது படிப்படியாக 50, 100, 200, 400, மற்றும் 800 µg/mL செறிவுகளில் உள்ள தொடர்ச்சியான தரநிலைக் கரைசல்களாக நீர்த்தப்படுகிறது, மேலும் ஒவ்வொரு செறிவும் மும்முறை உட்செலுத்தப்படுகிறது.
மாதிரி தயாரிப்பிற்கு, மைக்ரோவேவ் உதவியுடன் பிரித்தெடுத்தல் முறை பயன்படுத்தப்படுகிறது: 5.00 கிராம் பழம்/காய்கறி கூழை எடைபோட்டு, அதனுடன் 10 மிலி 0.1 மோல்/லிட்டர் ஹைட்ரோகுளோரிக் அமிலக் கரைசலைச் சேர்த்து, 60°C வெப்பநிலையில் மைக்ரோவேவ் மூலம் 10 நிமிடங்களுக்குச் சூடுபடுத்தி, 0.45 µm சவ்வு வடிகட்டி வழியாக வடிகட்டி, வடிகட்டிய திரவத்தைச் சோதனைக்காகச் சேகரிக்கவும்.
3. குரோமடோகிராபிக் நிலைமைகளை உகந்ததாக்குதல்
நகரும் நிலை என்பது 0.01 மோல்/லி பொட்டாசியம் டைஹைட்ரஜன் பாஸ்பேட் இடையகக் கரைசல் (pH 2.5)–அசிட்டோநைட்ரைல் (95:5) கலவையாகும். இதன் பாய்வு விகிதம் 0.8 மி.லி/நிமிடம் மற்றும் நெடுவரிசை வெப்பநிலை 35°C ஆகும். அசிட்டோநைட்ரைலின் விகிதத்தைச் சரிசெய்யும்போது, ​​கரிம நிலை 10%-ஐத் தாண்டும்போது, ​​ஆக்சாலிக் அமிலத்தின் தக்கவைப்பு நேரம் 3 நிமிடங்களுக்கும் குறைவாகக் குறைகிறது, ஆனால் சிகர வால் நீட்சி ஏற்படுகிறது. இறுதியாக உகந்ததாக்கப்பட்ட நிபந்தனைகளின் கீழ், ஆக்சாலிக் அமிலத்தின் தக்கவைப்பு நேரம் 4.2 நிமிடங்களாக உள்ளது. இதன் மூலம் அருகிலுள்ள சிட்ரிக் அமிலம் மற்றும் மாலிக் அமிலத்திலிருந்து முழுமையான பிரிப்பு அடையப்படுகிறது (பிரிதிறன் > 1.5).
4. முறை சரிபார்ப்பு
நேரியல் வரம்பு சரிபார்ப்பு, 10–1000 µg/mL வரம்பில் உச்சப் பகுதிக்கும் செறிவுக்கும் இடையே ஒரு நல்ல நேரியல் தொடர்பைக் காட்டுகிறது (R² = 0.9993). சிக்னல்-டு-நாய்ஸ் விகித முறையால் தீர்மானிக்கப்பட்ட கண்டறிதல் வரம்பு (LOD), 0.5 µg/mL ஆகும். மீண்டும் மீண்டும் செய்யும் சோதனைகளில், ஒரே கீரை மாதிரியின் ஆறு நகல் தீர்மானங்களுக்கான RSD 1.8% ஆகும். மூன்று நிலைகளில் (80%, 100%, மற்றும் 120%) செய்யப்பட்ட ஸ்பைக் மீட்பு சோதனைகள் முறையே 98.2%, 102.4%, மற்றும் 97.8% சராசரி மீட்புகளை அளிக்கின்றன, இது அளவுசார் பகுப்பாய்விற்கான தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்கிறது.
5. உண்மையான மாதிரிகளின் பகுப்பாய்வு
வணிக ரீதியாகக் கிடைக்கும் ஆறு பழங்கள் மற்றும் காய்கறிகள் பரிசோதிக்கப்பட்டன: கீரை (356 ± 12 மி.கி/100 கி), செலரி (215 ± 9 மி.கி/100 கி), தக்காளி (18 ± 2 மி.கி/100 கி), ஆப்பிள் (6 ± 1 மி.கி/100 கி), வாழைப்பழம் (கண்டறியப்படவில்லை), மற்றும் ப்ரோக்கோலி (89 ± 5 மி.கி/100 கி). தேசிய தரநிலை முறையுடன் (GB 5009.277-2016) ஒப்பிடுகையில், இரண்டு முறைகளுக்கும் இடையிலான சார்பு விலகல் 5%-க்கும் குறைவாக இருப்பது கண்டறியப்பட்டது, இது இந்த முறையின் நம்பகத்தன்மையை உறுதி செய்கிறது. குறிப்பாக, குறைந்த அளவு கொண்ட மாதிரிகளைப் பகுப்பாய்வு செய்யும்போது, ​​பாரம்பரிய டைட்ரேஷன் முறைகளை விட HPLC முறை அதிக உணர்திறனைக் காட்டுகிறது.
6. முக்கிய குறிப்புகள்
மாதிரி முன்சிகிச்சையின் போது pH மதிப்பை கண்டிப்பாகக் கட்டுப்படுத்தவும். சாற்றின் pH மதிப்பு 3-ஐத் தாண்டினால், கால்சியம் ஆக்சலேட் வீழ்படிவு ஏற்பட்டு, சோதனை முடிவுகள் குறைவாக இருக்கும். உப்பு வீழ்படிவு மற்றும் நிரல் அடைப்பைத் தவிர்க்க, நகரும் கட்டம் தினமும் புதிதாகத் தயாரிக்கப்பட வேண்டும். ஒவ்வொரு 20 ஊசிசெலுத்தல்களுக்குப் பிறகும், நிரலின் செயல்திறன் குறைவதைத் தடுக்க, நிரலை 30 நிமிடங்களுக்கு அசிட்டோநைட்ரைல்-நீர் (30:70) கொண்டு சுத்தப்படுத்தவும். நிறமிகளைக் கொண்ட மாதிரிகளுக்கு (எ.கா., ஊதா நிற முட்டைக்கோஸ்), ஊசிசெலுத்துவதற்கு முன்பு ஒரு திட-கட்ட பிரித்தெடுத்தல் சுத்திகரிப்புப் படியைச் சேர்ப்பது பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
7. விண்ணப்பம் மற்றும் விரிவாக்க வழிகாட்டுதல்கள்
இந்த முறையை, சிறுநீர் மற்றும் இரத்தம் போன்ற உயிரியல் மாதிரிகளில் உள்ள ஆக்சாலிக் அமிலத்தைக் கண்டறிவதற்கும் விரிவுபடுத்தலாம். நகரும் கட்டத்தின் கலவையைச் சரிசெய்வதன் மூலம் (எ.கா., டெட்ராபியூட்டைல்அம்மோனியம் ஹைட்ராக்சைடு சேர்ப்பதன் மூலம்), ஆக்சாலிக் அமிலம் மற்றும் அதன் வளர்சிதை மாற்றப் பொருட்களை ஒரே நேரத்தில் கண்டறிய முடியும். ஒரு நிறை நிறமாலைமானி கண்டறியும் கருவியுடன் இணைக்கப்படும்போது, ​​மிகவும் துல்லியமான சுவடு கண்டறியும் முறையை நிறுவ முடியும். உணவு பதப்படுத்தும் துறையில், குறைந்த ஆக்சாலிக் அமிலம் கொண்ட வகைகளைத் தேர்ந்தெடுப்பதற்கும் சமையல் செயல்முறைகளை மேம்படுத்துவதற்கும் இந்த முறை முக்கியமான தரவு ஆதரவை வழங்க முடியும்.